
BAC文库构建的技术支持:
材料
缓冲液和溶液
- 碱裂解液I , 4°C 50 mM 葡萄糖 25 mM Tris-Cl (pH 8.0) 10 mM EDTA (pH 8.0) 配制碱裂解液I 约100ml,灭菌,保存在四度。
- 碱裂解液II,新鲜配置,室温保存 0.2 N NaOH (从10N的NaOH新鲜制备) 1% (w/v) SDS 碱裂解液II应该新鲜配制,室温保存。
- 碱裂解液III, 4°C 5M 醋酸钾,60ml 冰醋酸,11.5ml SDW,28.5ml
- 酒精 - 70%酒精 - 异丙醇 - 酚:氯仿(1:1, v/v) - 醋酸钠 (3M,pH5.2) - STE,4°C 10 mM Tris-Cl (pH 8.0) 0.1 M NaCl 1 mM EDTA (pH 8.0)
- TE (pH 8.0) 10 mM Tris-Cl (pH 8.0) 10 mM EDTA (pH 8.0)
载体与菌株 BAC转化的大肠杆菌
培养基和抗生素 含12.5μg/ml氯霉素的LB平板和液体培养基
酶和缓冲液 溶菌酶 RNaseA,不含DNase 限制性内切酶和相应缓冲液
核苷酸/寡核苷酸 用于脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis)的DNA标准参照物
凝胶/点样缓冲液 脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gels,或者0.5%琼脂糖凝胶)
离心机/转头/离心管 其他 37摄氏度摇床

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